一、床单上的dna检测
dna检测床单精液大部分是没有做DNA亲子鉴定的，但是当地的亲子鉴定中心可以做点击获取当地中心电话
一、床单上的dna检测
南通亲子鉴定常用的亲子鉴定样本类型有血液（血痕、血斑）、口腔拭子（口腔黏膜细胞）、带毛囊的毛发（5岁以下小孩不建议采用），特殊亲子鉴定检材包括：精液精斑、烟头、口香糖、牙刷、流产的胚胎物，甚至牙齿、骨骼。产前胎儿亲子鉴定样本根据怀孕阶段不同，可以采集静脉血做隐私胎儿亲子鉴定。
自行采集特殊样本送检，因样本质量问题导致提取不出DNA，可以免费补寄亲子鉴定样本。
南通亲子鉴定精斑精液采集的方法：
种 安全套内的精液，用两根干净棉签沾取精液后，在温下自然晾干即可。
第二种 易携带物品上的精斑，应整体提取。如内衣、内裤、被单、毛毯、车座、睡衣等。
种 不易携带物品上的精斑，应提取附着检材。可使用纯净水浸湿的棉签擦拭物体上的精斑，然后将棉签自然晾干即可。
基本卫生条件：清洁的双手，新的洁净医用纱布和新的洁净信封！
1、先在干净的信封袋上作好标记，标记样本采集日期、样本身份如：父亲、母亲、孩子。
2、将干净纯净（避孕套里）的精液倒在事先准备好的纱布上，并用笔圈出其范围。
3、采集完成后，将检体放入原先准备好的信封内。
蔡先生家住，结婚多年妻子一直没能怀上小孩，去年单位派蔡先生经常出差，时间一久，他开始对妻子产生猜疑，担心妻子趁自己不在家的时间找外遇。有时趁妻子不注意时偷偷查看妻子手机里的微信、但没有发现证据，这并没有打消蔡先生的怀疑。
有一次蔡先生出差回家发现床单有一块小小的污渍心想妻子会不会在我出差的时候出轨了呢？这两天正好妻子去娘家了当天蔡先生就把床单拿到了南通DNA基因检测亲子鉴定做精斑精液鉴定检测，经过鉴定床单上的这块污染物性分泌物，但里面并未发现男性DNA。蔡先生对说是我胡乱猜疑了。
二、床单上的dna检测
内裤上精斑可以做DNA鉴定吗
这个不是的，一般10天左右都是没问题的。建议主尽快送去。一般正常情况下保存1-天都可以检测到的，操作很简单将可疑物品或可疑域用裂解剂充分湿润后手纸吸附，放入检测杯子中充分摇晃然后用试纸进行检测就可以了。所。
内裤精斑可以查出跟血液吻合的dna吗
鉴定中心能用内裤上的精斑做亲子鉴定的样本，还用，精液，混合精斑，指甲，烟头，牙刷，血液，血痕，带毛囊的毛发等做亲子鉴定的样本，样本采集方法请。自己可以单独拿着内裤去检验精斑吗做dna吗直接将精液弄到干净的纸巾上，或者用医用棉签沾取避孕套里的精液，用3-4根棉签。 一般亲子鉴定价格在2500-5000元之间，做亲子鉴定可以到广州亲子鉴定中心。
自己可以单独拿着内裤去检验精斑吗做dna吗
可以的，我们鉴定中心做过好多精斑的案子，但是一定要记住不能水洗，否则就没用了。
精斑保留多久可做dna鉴定
如果只是单纯的识别判断是不是精斑，用冰鉴精斑卡大概5-10钟即可有结果。检测没有明确的时效性，但需注意检测样品前应确保样品的完整性
24小时
精斑过多久还可以检测到？
精斑多久后不能检验
对于案，一般只要检测精斑就可以了，具体材料，可以鉴定中心。
精斑过多久就不能检测
用冰鉴精斑鉴定卡的话一般1-3个月均能检测保存时间较好环境较好的话几年都可以
一般情况一个星期半个月都可以鉴定的，我的一个月了用冰鉴试纸也检测出来了，听说实验保存的话长可以保存9年能检测到
精斑多久检查不到多久仍可以检测
内裤上的精斑多久才不能检测？
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二、床单上的dna检测
一、dna检测材料
标准简介（可根据此标准检测）
标准GB/T 416-2022标准名称法庭科学 DNA数据库中生物检材和被采样人信息项及其数据结构
发布日期实施日期
废止日期代替以下标准
提出单位全国技术标准化技术委员会归口单位全国技术标准化技术委员会
执行单位全国技术标准化技术委员会检验分会主管部门公安部
国内标准分类A92
标准分类.310
起草人刘冰、彭建雄、王彤、张喆、郝宏蕾、赵钊、彭磊、连高山、李冬涛、刘锋、刘超、刘宏、吴微微、田野、孙洁、徐曲毅、刘长晖
起草单位公安部鉴定中心、广州科学技术研究所、北京海华鑫安生物信息技术有限责任公司、辽宁省公安厅、浙江省公安厅
适用范围本文件规定了法庭科学DNA数据库中生物检材和被采样人的信息项、数据结构、相关要求与说明。
本文件适用于法庭科学DNA数据库建设，以及与法庭科学DNA数据库进行数据交换的外部系统的设计、开发和测试。
检测资质（部分）
检测实验（部分）
检测报告作用
1、可以帮助生产商识别产品的潜在问题或缺陷，并及时改进生产工艺，保障产品的品质和安全性。
2、可以为生产商提供科学的数据，证明其产品符合、国家和地相关标准和规定，从而增强产品的场竞争力。
3、可以评估产品的质量和安全性，确保产品能够达到预期效果，同时减少潜在的健康和安全风险。
4、可以帮助生产商构建品牌形象，提高品牌信誉度，并促进产品的销售和场推广。
5、可以确定性能和特性以及元素，例如力学性能、化学性质、物理性能、热学性能等，从而为产品设计、制造和使用提供参考。
6、可以评估产品是否含有有毒有害成分，以及是否符合环保要求，从而保障产品的安全性。
7、可以为政策监管部门提供独立的数据和意见，支持政策制定有效的政策和措施，确保公众的健康和安全。
检测流程
1、中析研究所接受客户委托，为客户提供检测服务
2、客户可选择寄送样品或由我们的工程师进行采样，以确保样品的准确性和可靠性。
3、我们的工程师会对样品进行初步评估，并提供报价，以便客户了解检测成本。
4、双方将就检测项目进行详细沟通，并签署保密协议，以保证客户信息的保密性。在此基础上，我们将进行测试试验。
5、在检测过程中，我们将与客户进行密切沟通，以便随时调整测试方案，确保测试进度。
6、试验测试通常在7-个工作日内完成，具体时间根据样品的类型和数量而定。
7、出具检测样品报告，以便客户了解测试结果和检测数据，为客户提供有力的支持和帮助。
以上为GB/T 416-2022 法庭科学 DNA数据库中生物检材和被采样人信息项及其数据结构的检测内容，如需更多内容以及服务请联系在线工程师。
二、生物检测dna的试剂
生物性检材的个体识别1、概述2、血痕检验3、精液斑检验4、唾液斑检验5、毛发检验6、骨骼检验7、牙齿检验8、其他组织检验9、个体识别结果评估个体识别（Personalidentification）
应用医学和生物学的理论和技术判断生物性检材是否同一来源。一、概述生物性检材的个体识别意义生物性检材通常细小且分布范围广罪犯难以彻底毁掉或掩盖身份不明的、活体或检材辨明身份为侦查提供线索为审判提供证据
预试验即筛选试验，特点：是血痕一定呈阳性反应，预试验阴性即可认定不是血痕或血痕已被破坏。所需的检材量少，灵敏度高，即使肉眼看不见，也呈阳性反应。操作简便快速。联苯胺试验Benzidinetest原理:H2O2
Hb/hamatinPoH2O+
无色[O]蓝色联苯胺联苯胺蓝灵敏度20~30万倍，极微量血痕即可出现阳性（+）,阴性（-）可否定血痕/血痕已被完全破坏3、确证试验
特异性强，灵敏度不高阴性不能否定血痕，只能说未发现血痕。血色原结晶试验方法：氯化血红素结晶试验光谱分析血色原结晶试验原理：血红蛋白在碱性溶液中分解为正铁血红素和变性珠蛋白，在还原剂作用下，正铁血红素还原为血红素，后者与变性珠蛋白或其他含氮化合物（如吡啶烟碱）等结合，形成血色原结晶。试剂：高山氏试剂
10%NaOH3ml混合置棕色瓶中
30%葡萄糖10ml
吡啶3ml
试剂配置好第二日使用较好，久置则反应缓慢，甚至失效。操作结果桃红色的星状、菊花状或针状结晶4、种属检验(Speciesidentification)
沉淀环试验抗原抗体反应琼脂凝胶免疫扩散试验免疫电渗电泳酶联免疫吸附试验----ELISA法
胶体金标记McAb-Hb试纸法
血清学方法细胞学方法生化方法血红蛋白等电聚焦抗-人球蛋白消耗试验胶体金标记McAb-Hb试纸法血痕血型测定红细胞血型：ABO、MNSs、Rh、Kell、Kidd、Duffy等红细胞酶型：EsD(酯酶D）、EAP（红细胞酸性磷酸酶）、PGM1（磷酸葡萄糖变位酶）、GLOI（乙二醛酶I）、ADA（腺苷脱氨酶）、GPT（谷丙转氨酶）等血清型：Hp、Gc、Gm、Km白细胞型：HLA-A、B5、血痕的个体识别血痕的DNA分析
DNA指纹图技术STR-PCR技术
各种各样的生物检材分泌物获得检材中细胞经物理化学作用释放DNA经过一系列实验操作及仪器分析得到分型结果应用PCR反应的对DNA进行几何级数放大统计学计算得出除此之外DNA分型的应用以人找物
对发生在不同时间、不同地点的案件所获取的犯罪进行串并。（如精斑、血迹、毛发等检材的串并）以人找人
尸源的寻找与认定。（如无名尸、碎尸、空难、焚尸等的认定）血痕其它检验
出血部位出血时间出血量出血者年龄出血者DNA两份血的同一认定
三、精液斑(seminalstain)案情猥亵非法性关系离婚检材
裤头卫生纸床单毛巾阴道拭子新鲜精液鉴定
是否精斑个人识别生育能力鉴定一、精液的组成精子精浆
精浆水90%
有机物精素黄素胆碱卵磷脂蛋白质氨基酸酶离子Na+K+Ca++P++Cl-Zn+SO42-特有蛋白P30
β—MSPβ—SM
α2
–SGP血型物质ABH
Gc
TfGmKm
AcpPGM1DIA3
精子的形态正常精子分头、体、尾三部分，长50－60um,外形似蝌蚪。正规正面观呈卵圆形，侧面观呈扁平形，由细胞和顶体组成。头长3-5um，宽2-3um，厚1-2um。颈部圆柱形，长约6um。尾部细长而弯曲，长达40-50um。HE染色：精子头呈蓝色，头前半部不着色或浅染，尾部呈红色。可见异型精子。精子在女性生殖道的检测时限性交后阴道内3-8H,宫颈2-5天，子宫、输卵管1-10天可检活精子。阴道内3-5天，宫颈14天可检见死精子。精子检出时限与被害人的体位、活动情况有关。精子检出率的高低与阴道内容物的提取部位有关，宫颈刮片和阴道后穹隆擦拭物的精子检出率较高。
三、精液检验
一般性状
乳白色，粘稠状液体,PH7.2—8.9
比重：1、—1.040、渗透压：0.55—0.58数量
2-2.5ml/次，1-1.5亿个/ml，总数4-6亿个形态、活动度。
头、体、尾，50-60um。
不正常的标准
活动不良的精子>40%
畸型精子>%四、精斑检验一）肉眼检查
二）预实验三）确证实验四）血型测定和DNA检测
1、肉眼观察可附于衣裤、被褥、草纸、被害人腹壁、大腿和阴毛上。必要时用紫外线照射（银白色带淡紫晕的荧光）2、提取方法奸杀或死因不明女性：取阴道内容物，必要时取肛门、会阴、口腔标本纸巾上的精斑精液样本被单上的精斑
内裤上的可疑斑痕3、精斑的预试验酸性磷酸酶检验原理
Acp
磷酸苯二钠萘酚
+
氨基安替比林结果铁氢化钾红色醌类特点阳性结果说明含有酸性磷酸酶，可能是精斑。阴性结果说明检材不是精斑或精斑酸性磷酸酶被破坏。由于酸性磷酸酶非前列腺独有，因此阳性结果不可轻易认定为精斑。温条件下酸性磷酸酶较稳定。4、精斑的确证实验一）形态学检查精子的检出二）免疫学检验抗人精沉淀实验抗P30沉淀实验其他三）生化检验LDH—XGD—DAP
（甘氨酰脯氨酰二肽基氨肽酶）一）精子的检出方法结果
HE染色顶部不着色蓝颈红尾品红-美蓝红头蓝尾藻红染色红色确证标准一个完整的精子数个典型的精子头二）免疫学方法抗人精血清沉淀实验抗P30血清沉淀实验高度的种属特异性与器官特异性无精子的精斑亦可为阳性
P30性质稳定检出时间长其他抗β—微精蛋白沉淀实验抗P30单克隆抗体ELISA法抗人前列腺特异性抗原p30的胶体金标记试纸法精斑预实验和确证实验结果5、精斑的个人识别ABO血型酶型血清型DNA多态性STR
Y-STR混合斑三）DNA分型
混合斑（精子、阴道上皮细胞
SDS、蛋白酶K完整精子DNA（阴道上皮细胞）
DDT二次消化SDS、蛋白酶DNA（精子）Y-STR基因座的特点1、呈单倍型父系遗传
2、突变率低
3、特别适用于学中混合斑的分析和父系家族成员的亲权鉴定NSampleDYS393DYSDYS389ⅡDYS390DYS391DYS3854嫌犯甲29231012/嫌犯乙121630231012/精斑121630231012/5嫌犯312310/卫生纸312310/6嫌犯12282311/受害人内裤12282311/7嫌犯121629231011/16受害人内裤121629231011/168嫌犯甲1229231012/12嫌犯乙1214282410/21嫌犯丙28231012/12混合斑12/28/29231012/12案件的Y-STR分型结果四、唾液和唾液斑(salivarystain)
唾液：现场烟头、口香糖、牙签、饮料容器及咬痕上唾液斑在白色背景上常呈淡黄色，在紫外下发出淡青色荧光唾液斑的证明淀粉酶的检测唾液斑的个体识别五、毛发
常见于地面、被褥、凶器上；死者手中、口中和衣服；案被害人内衣、外阴和大腿间提取时注意要用镊子提取，不能损坏其附着物需要解决的问题有：是毛发还是纤维；是人毛还是动物毛；毛发来自人体何部位；是自然脱落还是暴力拔脱，推断致伤物；毛发的个人识别。毛发的个体识别形态学观察仪器分析分子生物学方法STR分析mtDNA测序序列多态性母系遗传六、骨骼检验（一）骨的确定1．肉眼检查2．显微镜检查骨小管、骨板、哈佛氏管等骨组织学特征。3．焚烧试验可用烧灼方法做初步的检查。
（二）种属鉴定头颅、DNA检测（三）一人骨或多人骨的鉴别骨骼的解剖学特征、DNA分析（四）个人特征1．形态观察方法（1）DNA骨骼的DNA差异以骨盆更为明显，其次是颅骨，其他如胸骨、锁骨、肩胛骨、四肢长骨等亦有一定的DNA差异。（2）年龄未成年骨骼的年龄鉴定主要根据四肢骨骨化中心的出现时间及骨伤的愈合程度。20岁以后以耻骨联合的年龄变化更有价值，其他骨骼年龄鉴定有较大误差。（3）身高2．图像分析方法（1）面貌复原又称复容法(facialreconstruction)，根据颅骨的解剖学特点，用科学的方法重建与死者生前面貌相似的形象。（2）颅像重合颅像重合技术(superimpoingtechnique)是将颅骨用X线拍片，将失踪人的照片放大至同样大小，再以颅骨照片与生前照片重叠在一起，观察外形轮廓与眼、耳、口、鼻是否吻合,并按一定的标志点和审定线进行重合，观察审定线是否全部重合一致，判断两者是否同一。3、分子生物学方法骨骼可用PCR进行DNA分析。七、牙齿检验牙齿是人体更坚硬的组织和保存时间更长的器官，不易受环境与理化因素的影响。不同个体的牙齿发育状况及排列方式不同，随着牙齿的使用、磨损而出现的局部缺损特征，使牙齿具有了唯一性。这在学个人识别中有重要意义。（一）种属鉴定人与动物的牙齿差别较大。食肉类动物尖牙发达，食草类动物侧切牙、磨牙发达。（二）年龄推断1．根据牙齿的萌出顺序推断年龄2．根据牙齿的磨耗程度推断年龄2334444444433将上述牙磨耗度代入方程牙磨耗度值
733.4.348248.2714-8.12147.59243.6634-44-3.5.06.25+32.75推断年龄48（岁）实际年龄50（岁）误差2（岁）11111111
牙磨耗度值
70-3.7161-1.6651-2.3341-31-2.7121-1.481.6611-1-31-6.0441-51-2.676.71-
三、生物检验dna
DNA在鉴定中发挥着重要的作用，随着犯罪分子作案手段的不断进化，反侦查意识的增强，在犯罪现场寻找传统意义的犯罪线索较为困难的背景下，DNA检验的价值进一步凸显。
而在过去，受限于我国自主DNA检测技术的薄弱，公关机关不得不使用进口产品，价格相当昂贵，还常受到各类技术限制，让办案民警只能徒叹奈何。
自2014年成立至今，百特元研发、生产的DNA检测试剂逐步攻破了各大难关，特别是在面临疑难检材检测时，性能已经赶超进口产品，经过全国多地公安机关试用获一致好评，打破了技术封锁的同时，也打破了进口产品 “涨价”的底气。
关于DNA检测技术
人体细胞中含有约30亿个碱基对的DNA，每个人的DNA不完全相同，不同的碱基对数目达几百万之多，因此，通过分子生物学方法显示的DNA图谱也因人而异。
目前，使用的DNA检测技术，主要为荧光标记多基因座STR复合扩增检测技术。人类基因组存在一些短串联重复片段(STR)，这些序列能用PCR扩增且具有高度多态性。STR位点因其PCR产物片段长度短、DNA分子组成结构简单、PCR反应中引物与模板退火温度相似等特点，为对多个STR位点复合扩增检测提供了条件。
基于以上特点，使应用荧光染料标记引物的方法对多个STR位点同步检测分析成为现实。
如今，该技术在侦查破案、查找拐卖儿童和无名尸源、死亡案件个体识别以及证实犯罪等方面发挥了显著作用。
在实际工作中，往往难以拿到合适的样本，所以检测试剂必须能够突破常见的疑难监测点，这也是进口产品的重点技术壁垒。其中包括：微量检材、降解生物检材、混合生物样本检材。
检测疑难点——微量检材
随着现代讯息和传播技术的发展，加之犯罪分子的反侦破意识不断增强，很多犯罪分子在案发后，会破坏传统意义的各种作案证据，在这样的背景下，微量检材成为侦破的重要线索。
所谓微量检材，就是DNA 含量少于 100 pg，相当于 个双倍体或 30 个单倍体细胞的生物样本。
从目前的实践来看，微量检材的主要来源包括如下几方面：犯罪分子的衣着或穿戴物，比如帽子、头套甚至内衣裤等;犯罪分子作案使用的作案工具，主要是相对细小的把手套或者手柄等;犯罪分子可能会接触的一些生活用具，主要是一些吃剩的食物以及未及时清理的其他物品;此外还有一些可能会含有犯罪分子DNA信息，但容易被忽视的物件，比如烟头、拭子、犯罪分子遗留的指甲等。
检测疑难点——降解生物检材
在实际的办案过程中，一些生物检材容易受到各种环境的干扰，从而给鉴定带来困难。从外部环境来看，以下几个因素对降解生物检材的降解具有重要影响。
，温度。从化学降解的角度来分析，如果温度提高20℃，生物大分子的降解速度将会提高20倍左右。反之，如果温度降低，则会抑制生物降解速度。
第二，湿度。一般而言，湿度在60%-70%，生物降解的速度适中。如果过湿，则可能加快降解速度。
第三，微生物、不适宜的酸碱环境等对降解也有极强的影响。如果生物检材降解，将会导致DNA片段分解，在检验中，出现基因信息的缺失，不利于侦破工作。
检测疑难点——混合生物样本检材
混合生物样本来自2个以上个体。由于个体在样本中所占的比例不同，因此不同样本的检出难易程度并不一致。
百特元-突破疑难关卡，性能比肩进口产品
百特元是国内家打破进口垄断，产品全链条国产化并用于法庭科学DNA鉴定的企业，面对疑难检材关卡，百特元不断研究发展，终于逐步攻破，相较进口试剂性能更胜一筹，让办案民警工作更有效率。
①产品识别率更高：百特元的产品包含的基因座更多，鉴定检测试剂和DNA数据库检测试剂相对进⼝同类产品识别率更高。
②灵敏度更高：百特元的产品相比同类产品，灵敏度更高。
③综合检测时间更短：百特元的产品综合检测时间与进口同类产品相比时间更短，单位检测效率更高。
④陈旧、降解检材检出率更高：百特元的产品对陈旧、降解检材检出率更高，优于进口同类产品。
截至目前，百特元自主研发的STR试剂盒在多地公安机关的使用过程中，屡助干警破获积案、重案、大案，获得大量好评。
在百特元突破美国产品垄断后，为我国公安机关提供了不再唯一的技术产品选择。动摇了美国产品统治地位的同时，我国的相关技术、整体产业链开始逐步上行。感受到“危机”的美国产品多次降价，试图用价格手段重新掌控国内场。
经历过垄断、制裁后，我们清楚的知道，国产替代只有一条艰难攀登的山，暂时的受制于人是为了蓄力而起，但长久的受制于人，必将迎来“科技上的阉割”，只能任人鱼肉。
在当下，行业内全国产化趋势已经一步踏开，在未来百特元将专注于自身技术水平发展，坚定超越进口产品性能，彻底打破技术垄断和封锁，无惧千沟万壑大步向前，为全国公安干警做好技术支持，为行业发展走向世界前列不懈努力。
四、dna生物检材的提取
随着DNA检验技术灵敏度的提高和各级公安机关应用DNA技术破案的意识日益增强, 越来越多的案件需要进行接触DNA的检验。接触DNA(touch DNA, )是指通过皮肤接触而遗留在客体表面上的DNA, 主要来源于人体皮肤脱落的上皮细胞。97年, Oorschot等[首次在指纹上提取到了微量的接触DNA。Wickenheiser[的研究表明, 每人每天大约有000个上皮细胞自然脱落, 构成了接触DNA的主要来源, 因此, 国内也常把接触DNA称作脱落细胞DNA。
接触DNA并不简单的等同于微量DNA(trace DNA、LCN或LtDNA)。Gill等[更早将微量DNA定义为模板量小于100pg的DNA; Caddy等[则将200pg作为界定微量DNA的标准; Budowle等[认为由于DNA定量方法之间存在差异, LCN分型应定义为正常阈值之下的分析结果; Gill等[后来发表相同的观点。与微量DNA侧重于DNA含量相比, 接触DNA则侧重于DNA的来源。由于在多数情况下接触DNA的含量少, 对其进行STR检验要遵循微量DNA的分析方法。
接触DNA检材与常见的生物检材如血痕、精斑相比, 属于微量疑难生物检材, 对它的检验是目前DNA检验的难点和热点。关于接触DNA的检验成功率, 说法不一, 文献报道的结果差别也较大。Harbison等[统计了908份接触DNA检材的检验成功率, 结果45%的检材获得了DNA分型(包括完整、部分和混合分型)。Raymond等[报道的接触DNA检验成功率为35%, 在每份接触DNA检材中平均可以提取到1.7ng DNA。Daly等[对100例玻璃表面遗留的接触DNA研究, 结果检验成功率为9%。
接触DNA检验成功率不同的原因是由于影响因素很多。个体差异、载体的物理属性、接触时间、遗留时间、检材提取是否准确、检验时能否突出检材的重点部位、检验方案与策略是否得当以及能否正确判读分型结果等都会对检验结果造成影响。
1 个体差异
皮肤上皮细胞脱落的难易程度在不同的人之间存在差异。Lowe等[将不同的个体分为易脱落者(good DNA shedders)和不易脱落者(poor DNA shedders)两类。Allen等[研究了不同个体触摸玻璃后转移接触DNA的差异后发现, 有.6 %的人(易脱落者)遗留在玻璃表面的指纹上可以获得完整的STR分型, 60.5%的人(中等程度脱落者)可以获得部分分型, 只有20.9%的人(不易脱落者)没有获得检测结果。Phippis等[则认为, 不能简单的将个体归属于哪一类脱落者, 即使对于同一个体而言, 接触物体时的特定状态对接触DNA的影响也非常大。触摸行为用的左右手、接触前是否洗手、皮肤是否出汗、接触的剧烈程度等都会对遗留的DNA量有影响; 一些个人习惯, 如触摸脸部、头发等, 也会导致在接触物体后转移更多的脱落细胞, 结果造成不易脱落者在特定的状态下也可能转移足够数量的接触DNA; 反之亦然。
2 载体属性
人在接触不同载体时, 由于其表面的光滑程度不同, 遗留的脱落细胞数量会不同。当接触粗糙表面的载体时, 皮肤局部受力会比较大, 往往比光滑的表面留下更多的接触DNA。Daly等[研究了皮肤接触不同性质的载体表面转移接触DNA的差异。对300名参与者随机分为三组, 分别触摸玻璃、纤维类物品和木头3种物体60s, 使用胶带粘取物体表面的附着物, 然后进行DNA提取, 结果表明, 在三种物体表面平均可以提取到0.52ng、3ng、5.85ng的接触DNA, 检验成功率分别为9%, 23%, 36%。在实际的案件检验中, 不同载体表面接触DNA的检验成功率也存在差异。Harbison[发现, 在统计的检材类型中, 光滑坚硬的载体表面提取接触DNA的成功率更低。Raymond[的数据表明, 手枪、刀柄等案件检材上提取到的接触DNA更少, 平均为0.6ng, 检验成功率也更低。
3 接触时间
接触时间的长短会影响到接触DNA的量。一般认为, 接触时间越长, 转移的接触DNA越多。Wickenheiser[认为接触动作是瞬间完成的, 因此在较短的时间段内(5s, 10s, 20s), 时间对接触DNA的影响不大。然而, 如果时间跨度较长, 接触DNA会显著增加。Raymond等[ 在触摸多次的钱包上提取到11.7ng DNA; Oorschot[在接触了min的面罩和杯子上分别提取到6.8ng和34ng DNA, 在戴了20min~90min的手套上提取到51ng的接触DNA。显而易见, 穿戴时间较长的衣帽上会比偶尔触摸的物体表面遗留更多的接触DNA, 其检验成功率会大大增加。在本实验对同一案件的473件衣物进行的接触DNA检验中, 剪取衣领部位, 一次检验成功率(获得10个以上STR基因座分型)达到70%以上。
4 遗留时间
接触DNA可以在物体表面遗留多长时间是一个令人关心的问题。Raymond等[研究了已知量的DNA在三种不同的载体表面(木材、聚乙烯化合物、玻璃)上的遗留时间。结果显示, 可以回收到的接触DNA随着时间的推移显著减少, 两周以后基本上不能够再被检出; 接触DNA在渗透性载体上的遗留时间要长于非渗透性载体。Linacre[报道, 接触36天之后依然能够检出接触DNA。接触DNA在载体表面的遗留时间还与其所处的不同环境条件有关, 如温度, 湿度, 空气流动等。不可否认的是, 遗留时间确实是影响接触DNA检验成功率的因素之一。因此, 接触DNA检材的及时提取和检验非常重要, 能增加其检验成功率。
5 检材的提取是否正确
6 检验时突出重点部位
在检材表面准确找到接触部位并不是一件容易的事。Lennard等[借助多波段光源寻找脱落细胞的附着位置; Sewell等[则利用指纹显现方法寻找接触部位。在具体实践中, 这些方法往往具有局限性或并不实用。大多数情况下发现接触DNA还是利用经验并结合现场分析来找出检材的重点部位。一旦确定了重点部位, 便可在更短的时间内获得检测结果, 既节省资源, 也能提高效率。当无法确定检材的重点部位时, 可以在检材表面尽可能多的选取不同部位进行DNA提取, 但是由于检验的工作量大, 会耗费较多的人力和物力, 而且成功率不高。
7 选择合适的检验方案及策略
个体差异、载体属性、接触时间、遗留时间对接触DNA检验的影响是客观存在的。作为实验技术人员, 针对接触DNA的检验, 在检材前处理、DNA提取、扩增和检测等阶段, 需要根据具体情况制定合适的检验方案。这对于接触DNA的检验成功非常重要。
7.1 检材的前处理
Kita等[的更新研究认为在人体皮肤表面存在少量的游离DNA(cell free nucleic DNA, CNAs), 能通过触摸转移到客体表面。Quinones等[从80%的受测者的汗液中检测到游离DNA的存在。目前认为, 游离DNA也是接触DNA的来源之一。有些收集脱落细胞的方法, 比如真空吸附等, 会将游离DNA排除在外, 导致提取到的接触DNA减少, 从而降低检验成功率。
7.2 接触DNA的提取
目前, 提取DNA的方法很多, 只要采用的方法能够获得用于PCR分析的DNA模板都可使用, 必要时需对DNA样品进行纯化和浓缩[。Bright 等[使用有机法提取鞋垫上的接触DNA; Anslinger等[采用 Chelex-100法从现场擦拭物中提取DNA, 并用Microcon纯化和浓缩。实际工作中, DNA实验应该选用在自己实验得到验证的更佳方法。目前, 采用磁珠法提取微量DNA得到了广泛应用。该法的优点在于操作简便、DNA提取和纯化一次完成, 能有效去除杂质干扰, 还可以通过调整洗脱体积改变提取到的DNA浓度。
7.3 接触DNA的扩增与检测
接触DNA进行STR检验时, 对PCR扩增和电泳检测的条件进行改进, 均可以提高检验的灵敏度。PCR扩增时可以采用增加循环数、模板浓缩、缩小反应体系、优化引物、延长退火时间、增加聚合酶量、改变缓冲体系等不同的方法来提高检验的灵敏度。电泳检测时, 可以采取增加上样量(从1μ L提高到5μ L)、调整上样电压(从3000V提高到6000V)、上样时间(从10s增加到20s)、使用低渗的高质量甲酰胺等方法改善电泳质量, 也可对扩增产物纯化后进行电泳。
8 正确的结果分析与应用
微量DNA扩增过程中, 由于模板量少, 加之循环数的增加, 容易产生不对称扩增、等位基因的丢失和增加、影子带增强等问题[。到目前为止, 对微量DNA的分析还缺乏一种普遍接受的统计学方法。因此, 结果分析时应十分谨慎[:(1)严格设置阴性对照, 作为评定和分析多余谱带的参考; (2)可将分析阈值调低, 但是要保证峰值大于三倍的噪音水平; (3)进行重复检验, 重点关注多次出现的等位基因; (4):谨慎认定纯合子, 特别是对于扩增片段较长的STR基因座; (5)DNA数据进行数据库检索时要采用容差比对的模式。目前, 有两种分析方法[用于分析微量DNA的分型图谱:一是共有图谱分析(consensus profile)法, 采信重复出现的等位基因; 二是综合图谱分析(posite profile)法, 将出现过的等位基因均考虑在内。在具体实践中, 大多采用共有图谱分析的方法, 取得了较好的效果。
综上所述, 接触DNA检验的影响因素较多, 稍有不慎会导致检验结果不理想。因此, 要提高接触DNA检验的成功率, 就需要在检材的科学提取与及时送检、检验时突出重点部位、选择合适的检验策略与方案, 以及正确判读STR分型结果等方面多下功夫。毫无疑问, 接触DNA检验的出现极大的拓宽了DNA检验的范围, 在案件侦破中发挥了重要作用, 然而过于强调接触DNA的重要性往往会导致检验资源的不合理利用, 更容易忽视常规生物的发现和提取[, 因此, 对各种类型的DNA检材树立全面、理性、科学的认识也是十分必要的。
The authors have declared that no peting interests exist。
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